本標準規定了食品中菌落總數(Aerobicplatecount)的測定方法。

本標準適用于食品中菌落總數的測定。

2術語和定義

3.2 冰箱：2℃~5℃。

3.4 天平：感量為0.1g。3.3 恒溫裝置：48℃±2℃。

3.5 均質器。

3.7 無菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

3.8 無菌錐形瓶：容量250mL、500mL。

3.9 無菌培養皿：直徑90mm。

3.11 放大鏡或/和菌落計數器。加一個試管和配套試管塞（尺寸15*150mm）

4  培養基和試劑

4.2 菌落總數測試片

4.3 磷酸鹽緩沖液

4.4 無菌生理鹽水

6  操作步驟

6.1  樣品的稀釋

6.1.1 固體和半固體樣品：稱取25g樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/min~10000r/min均質1min~2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min~2min，制成1∶10的樣品勻液。

6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1∶10的樣品勻液。

6.1.3 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1∶100的樣品勻液。

6.1.4 按6.1.3操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計，選擇1個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。

6.1.6 及時將15mL~20mL冷卻至46℃~50℃的平板計數瓊脂培養基(可放置于48℃±2℃恒溫裝置如：恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。

6.2  培養

6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36℃±1℃培養48h±2h。水產品30℃±1℃培養72h±3h。如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4mL)，凝固后翻轉平板，按6.2.1條件進行培養。

6.2.2 如使用菌落總數測試片,應按照測試片所提供的相關技術規程操作。

6.3  菌落計數

6.3.1 可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony-formingunits，CFU)表示。

6.3.2  選取菌落數在30 CFU~300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30CFU的平板記錄具體菌落數，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。

6.3.3 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數。

6.3.4 當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。

7  結果與報告

7.1 菌落總數的計算方法

7.1.3 若所有稀釋度的平板菌落數均＜30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

7.1.4 若所有稀釋度的平板上菌落數均＞300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

7.1.5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。

7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分＜30CFU 或＞300CFU 時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

7.2.1 菌落數小于100CFU 時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告。

7.2.2 菌落數大于或等于100CFU 時,第3位數字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數字,后面用 0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數字。

7.2.3 若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。

7.2.4 稱重取樣以 CFU/g為單位報告,體積取樣以 CFU/mL為單位報告。