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一、菌種原因
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菌種老化
菌種如果經過連續頻繁的傳代達十幾次甚至幾十次，就會造成菌種老化，岀現生長緩慢甚至不生長的情況。
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野生菌種
相比于標準菌株，有一些野生分離的菌種本身比較脆弱，對營養要求比較高，對外界不良環境也比較敏感，難以在普通的平板上生長，往往需要加入特殊的營養物質。
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菌種沒有進行充分活化
當我們拿到一株菌的時候，該菌種往往是處于—個保藏狀態的，這就需要我們通過合適的培養基來逐代擴大培養，得到活力旺盛的菌株，所以充分活化的目的就是要讓菌種逐漸適應培養環境，從而在平板上快速生長。
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樣品中的菌
有的樣品中本身含菌量就較少，如水樣、供試液等，接種量低造成平板上無菌生長。還有的樣品中含有一些抑菌成分，會殺死樣品中的菌，導致無菌落生長。
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購買的商品化菌株
有一些商品化的菌株，如益生菌、菌肥、可食用真菌等，本身進行過基因改造，不能進行連續傳代擴大培養，故在平板上難以生長。
二、人員操作不當
1、容器未洗刷干凈，殘留的抑菌成分導致菌不生長。
2、培養基配置過程中稱量錯誤，加入添加劑比例錯誤等。
3、過度滅菌，有很多培養基成分不耐高溫，過度滅菌會導致成分失效。
4、調pH值錯誤，不同溫度下培養基的pH值也會不一樣，未正確的調配pH值，也會導致菌不生長。
5、在實驗操作過程中失誤，特別是在稀釋菌液過程中少接或者錯接菌。
6、未放置合適的培養條件，根據不同菌對氧氣的需求程度，可以分為需氧、厭氧、微需氧培養等。根據不同菌對溫度的需求，又可以在25°C、30°C、35°C、42°C、56°C等不同溫度下培養。
三、培養基及添加劑原因
1、成品培養基本身質量不好，如原材料純度不高、含有抑菌成分、原材料之間配比錯誤等都會導致成品培養基不合格。
2、特殊培養基及添加劑未正確存放，未遮光、冷藏、嚴格密封保存等導致失效。
3、培養基及添加劑超過有效期或者臨近有限期，營養成分存在一定程度的失效導致菌不生長。
4、培養基及添加劑營養不夠或者不適合培養某類菌種。有一些菌種本身營養要求比較特殊，需要添加某些特殊營養后方能生長。
5、培養基pH值發生改變，有一些特殊的成品培養基pH值隨時間會存在一定程度的改變，在使用前需要對pH值重新進行調整，否則也會導致菌不生長。
